技術簡介
蛋白質互作研究按照實驗目的可分為兩大類,一是驗證兩個蛋白是否存在相互作用,二是篩選某個興趣蛋白的互作蛋白。 目前,常用的蛋白質互作分析技術有:免疫共沉淀(CO-IP),pull-down、串聯親和純化法(tandem affinity purification,TAP)和基于SILAC技術的免疫共沉淀(SILAC-IP)等。
信號通路研究:尋找特定目標蛋白的互作蛋白。 構建誘餌蛋白的雙標載體——包裝慢病毒——篩選穩轉株——提取總蛋白——串聯親和純化——洗脫液的蛋白酶解——LC-MS/MS——蛋白質定性和定量結果——篩選實驗組獨有蛋白
1. 捕獲到的是天然互作的蛋白,符合體內真實生理情況,可信度高。
2. 采用兩步純化,能有效減少假陽性率。
1.Proteomic Analysis of the Human Cyclin-dependent Kinase Family Reveals a Novel CDK5Complex Involved in Cell Growth and Migration.Mol Cell Proteomics. 13(11):2986-3000(2014).
2.Defining the protein-protein interaction network of the human protein tyrosine phosphatase
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