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RNA pull down

技術概述       
RNA pull down是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術。該技術通過體外轉錄靶RNA的一部分或全長,用生物素標記轉錄產物,再與蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白質復合物。該復合物可與鏈霉親和素磁珠結合,從而把靶RNA結合蛋白從蛋白提取液中分離出來。復合物從磁珠上洗脫下來,通過western blot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合;通過質譜儀檢測,可以篩選到與靶RNA結合的蛋白。
 


技術原理  
生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用;其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此用生物素標記核酸后,利用生物素和鏈霉親和素之間的親和作用,可以純化出各種生物大分子復合物。
       
RNA pull down實驗是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子,再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體,洗脫得到RNA結合蛋白質。
 

技術應用

靶RNA結合蛋白的驗證或篩選。
 



技術流程


服務信息


 輝駿生物:RNA pull down技術服務內容

參考文獻

1.Identification of RNA-Protein Interactions Through In Vitro RNA Pull-Down Assays. Methods MolBiol 1480:99-113(2016).
       
2.The long noncoding RNA ASNR regulates degradation of Bcl-2 mRNA through its interaction with AUF1. Sci Rep 6:32189 (2016).
       
3.Silencing of the mRNA-binding protein HuR increases the sensitivity of colorectal cancer cells to ionizing radiation through upregulation of caspase-2. Cancer Lett 393:103-112(2017).


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