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DNA pull down

技術概述
DNA pull down-MS是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術將生物素標記的DNA片段結合在鏈霉親和素磁珠上,再與細胞核蛋白孵育,純化出與DNA片段互作的蛋白,洗滌洗脫得到的蛋白產物,做western-blot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結合;做質譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如具體某個或某些轉錄因子/組蛋白等)。

 
技術原理


生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用;其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此用生物素標記核酸后,利用生物素和鏈霉親和素之間的親和作用,可以純化出各種生物大分子復合物。
       
DNA pull down實驗首先針對靶標區域設計DNA探針,探針經過脫硫生物素標記,跟偶聯在磁珠上的鏈霉親和素結合;細胞核提取物與磁珠-DNA探針孵育,純化出與靶DNA片段結合的蛋白復合體,洗脫得到DNA片段的結合蛋白質。
 


技術應用


目的DNA片段的互作蛋白(如轉錄因子等)篩選。
 

技術流程      


輝駿生物:DNA pull down技術流程

 
服務信息


DNA pull down服務內容


參考文獻
1.A requirement for breast-cancer-associated gene 1 (BRCA1) in the spindle checkpoint. Proc Natl AcadSci U S A 101(49):17108-17113(2004).
       
2.Identification of DNA-binding proteins that interact with the 5'-flanking region of the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. J Pharm Biomed Anal 116:94-100(2015).



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