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蛋白質質譜鑒定

技術概述


質譜是將待測物質變為氣態離子并將離子按質荷比(m/z)進行分離,檢測各種離子譜峰的強度而實現分析的一種方法。

蛋白質定性通常采用質譜分析結合數據庫檢索的方法,所分析的樣本可以是蛋白質溶液、蛋白質膠條或膠點。


簡單蛋白樣本,例如雙向電泳斑點或純化蛋白,通常采用MALDI-TOF/TOF質譜(MS/MS)進行分析。
       

混合蛋白樣本,例如蛋白溶液,或SDS-PAGE條帶,通常采用液相色譜-質譜聯用(LC-MS/MS)技術進行分析。應用領域有:亞細胞組分的全譜分析,IP、co-IP、Pull-down后的互作蛋白鑒定,或其他中等復雜蛋白樣本的鑒定。
 



技術原理


串聯質譜(MS/MS)檢測蛋白的原理是:蛋白先經胰酶消化成肽段,肽段在質譜儀中離子化后,會帶上一定量的電荷,通過檢測器分析,可得到各肽段的質荷比(m/z),從而得知各肽段的相對分子質量。為獲得肽段的序列信息,質譜儀會選取某些肽段進行破碎,再次分析,獲得二級質譜。用檢索軟件選擇相應的數據庫對質譜數據進行分析,同時以打分的形式評判鑒定結果,當打分大于某個閾值時,即判定質譜鑒定成功,反之則鑒定失敗。


LC-MS/MS方法是將蛋白酶切消化為肽段混合物,之后這些肽段先經高效液相色譜分離形成簡單的組分,再進行串聯質譜(MS/MS)分析;因此適合于混合蛋白樣本的鑒定。
 


技術優勢


1. 采用高效液相色譜和質譜聯用的分析方法,可以一次性鑒定成百上千種蛋白質。


2. 鑒定準確性和靈敏度高。
 



技術流程


輝駿生物:蛋白質質譜鑒定技術流程

 

服務信息



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服務案例
蛋白質質譜鑒定結果:蛋白質經過酶切,一級質譜分析后選取強度較大的峰進行二級質譜分析。

圖1:蛋白質質譜鑒定結果:蛋白質經過酶切,一級質譜分析后選取強度較大的峰進行二級質譜分析。

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