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Pull-down實驗

Pull down概念

在Pull down實驗中,帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲,形成“次級親和支持物”,用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產物洗脫后,經Western blot驗證或LC-MS/MS,即可證明或鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。


Pull down實驗流程


輝駿生物: Pull down流程示意圖
    圖1. Pull down流程示意圖



Pull down實驗方案設計


1、構建含His或GST標簽的誘餌蛋白原核表達載體;

2、原核表達誘餌蛋白(我們采用自誘導培養基培養細菌,能有效降低包涵體的形成);

3、細菌裂解液過柱,帶標簽的誘餌蛋白被固相化親和配基捕獲,產生“次級親和支持物”;

4、待測樣品裂解液過柱孵育,與誘餌蛋白互作的蛋白被“次級親和支持物”吸附;

5、清洗,離心,去除未結合的雜蛋白;

6、洗脫,得到誘餌蛋白及其互作蛋白的復合物;

7、如要驗證某蛋白X與誘餌蛋白互作,則將6.所得的蛋白復合物與X蛋白的抗體孵育,做Western blot驗證即可;

8、如要尋找誘餌蛋白可能的互作蛋白,則需將6.所得的蛋白復合物做LC-MS/MS鑒定。

圖2. Pull down實驗流程圖



生物信息學分析

輝駿生物:GO注釋統計
GO注釋統計

 
Pathway分析Pathway分析
 
                                                   
 
Pathway分析




Pull down實驗技術服務內容


1、原核表達載體構建;

2、融合蛋白的誘導表達與純化;

3、pull down捕獲互作蛋白;

4、Western blot驗證或LC-MS/MS鑒定互作蛋白;

5、數據檢索、生物信息學分析;

6、結果分析與報告整理。



訂購Pull down技術服務須知


為保證pull down實驗順利進行,請告知您的研究背景和目的,并提供目的蛋白對應的mRNA序列或對應基因的NCBI登錄號,及擬用的融合標簽。
 


實驗周期及費用


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