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2D Western blot

2DWestern blot概述


2D-WB是雙向電泳與傳統western blot相結合的一項技術。一般實驗流程為抗原蛋白混合物經雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可檢測出抗原等電點或分子量發生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾研究領域有廣泛應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術,還可能從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

 

技術服務流程



 

2DWestern blot技術服務內容


1、蛋白質抽提與定量;
  
2、雙向電泳;
  
3、轉膜,封閉,孵育,顯示成像。

 


送樣須知


樣本應避免各類污染和反復凍融,妥善保存,用干冰或液氮包裝寄送;廣州本地客戶可上門收樣。
   
注:接收組織、細胞、蛋白質溶液等樣品;相應一抗如果公司抗體庫里沒有,也需要客戶自己提供。

 


2DWestern blot技術服務報告內容


1、蛋白質定量結果及電泳上樣量;
  
2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果;
 
3、2D Western blot完整的實驗報告,包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。

 

2DWestern blot實驗服務案例



 

實驗服務周期及收費標準


咨詢本公司QQ/電話:400 699 1663

 

質量承諾


提供清晰、客觀的2D Western blot結果。

 

附:2DWestern blot實驗步驟


1、樣本制備,盡可能溶解全部蛋白質,破壞蛋白與蛋白間的相互作用,避免其他雜質的干擾,與IEF兼容等。

2、雙向電泳的主要步驟,第一向電泳(IEF),膠條平衡,第二向電泳SDS-APGE。

3、第二向電泳結束后,取出凝膠進行轉膜,可選濕法轉移和半干法轉移。常用NC膜和PVDF膜。

4、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

5、一抗孵育,根據抗體說明書選擇孵育時間,常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、二抗孵育:根據一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影,直到出現清晰的蛋白質條帶,清水漂洗后在定影液中定影,曝光時間需綜合考慮蛋白質的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等。

8、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。



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